El Campeonato Ecuatoriano de Fútbol Serie B 2001, conocido oficialmente como «Campeonato Nacional de Fútbol Serie B 2001», fue la 24.ª edición de la Serie B del Campeonato nacional de fútbol profesional en Ecuador, mientras que fue la 37.ª edición incluyendo los torneos cortos conocidas como etapas. El torneo fue organizado por la Federación Ecuatoriana de Fútbol y contó con la participación de diez clubes de fútbol. El campeón del certamen fue Liga Deportiva Universitaria.
En este torneo se incorporó UDJ, campeón de la Segunda Categoría de 2000; además de los descendidos de la Serie A: Técnico Universitario tras 1 año de permanencia en la misma y Liga Deportiva Universitaria (que descendió por segunda vez desde su ascenso en la segunda etapa de la Serie B de 1978).
Por tercera vez, los equipos del Guayas no jugaron en la Serie B.
Por segundo año consecutivo, se repitió exactamente el formato previo: un torneo de 36 fechas por el sistema de todos contra todos a dos etapas, ida y vuelta.
PJ = Partidos jugados; PG = Partidos ganados; PE = Partidos empatados; PP = Partidos perdidos; GF = Goles a favor; GC = Goles en contra; DG = Diferencia de gol; PTS = Puntos
↑El partido Audaz Octubrino vs. Univerisidad Católica en el Estadio 9 de Mayo de Machala en el cierre de la jornada 36 del Campeonato Ecuatoriano de Fútbol de la Serie B no se jugó por ser de trámite para estos dos equipos, durante el partido este fue cancelado debido al mutuo acuerdo.
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